Page 10 - InvUnivMult2006

Facultad de Ciencia y tecnología
Objetivo
En este trabajo se propuso aislar e identificar hon- gos y oomycetos de muestras de peces Carasssius auratus con infección micelial evidente y muestras de agua de estanques de peces dulceacuícolas.
Dada la capacidad de los oomycetos para infectar organismos de distintos tipos se analizó también la respuesta del kit BIAADETECT obtenido a partir de D. coccus, insecto de importancia económica, ante la presencia de los hongos y oomycetos ais- lados de peces y muestras de agua.
Método
Reactivos. Los reactivos utilizados en este traba- jo fueron de la más alta calidad y se obtuvieron de las compañías Sigma Chemical Co. (St. Louis Missouri).
El kit BIAADETECT se obtuvo de la compañía pro- ductora de colorantes naturales Tlapanochestli Coyotepec, Oaxaca (www.aztecacolor.com).
Obtención de muestras de estanques y aislamien- to de colonias fúngicas. Se tomaron muestras de 500 ml de estanques de peces dulceacuícolas, las cuales se procesaron en el menor tiempo posible después de su obtención para evitar así cambios en los parámetros de pH, temperatura, oxígeno, entre otros, que pudieran causar alteraciones en los patógenos presentes, producción de bacterias y formación de hongos externos a la muestra. Para obtener muestras de los peces infectados (Carassius auratus) se realizó un raspado superfi- cial de la epidermis con asa de siembra, tomando el material a partir de la parte media lateral del cuerpo. El material obtenido se suspendió en 100 ml de agua estéril.
Cultivo de hongos y oomycetos. A partir de las muestras de agua y raspados se hicieron dilucio- nes con solución salina amortiguadora de fos- fatos estéril (PBS 1X), para cultivarlas según las condiciones de la norma oficial mexicana (NOM- 111-SSA1-1994) para la identificación de hongos. Para este fin alícuotas de 25 ml se sembraron por extensión sobre la superficie de medio papadex-
trosaagar (PDA) incubados a 26o C. Transcurridas 120 h se realizaron preparaciones en fresco (KOH al 10% y azul algodón) observadas en microsco- pia de luz. Los hongos y oomycetes obtenidos se enviaron para su identificación al departamento de Botánica de la Escuela Nacional de Ciencias Biológicas del IPN.
Determinación de la presencia presuntiva de patógenos mediante el kit BIAADETECT. Para las determinaciones se uso el kit BIAADETECT según las especificaciones de uso del fabricante. Se uti- lizaron alícuotas de 100 μl de muestras de estan- ques y las obtenidas de epidermis. Las muestras se incubaron con 50 ml de BIAADETECTdurante 20 min a 37o C, centrifugando a 14000 rpm por 3 min y se leyó la absorbancia del sobrenadante a 495 nm (pico máximo de absorbancia del ácido carmínico) (Schmitt, P & Gunter, H, 1984).
Resultados
Aislamiento e identificación de hongos presentes en muestras de estanques dulceacuícolas. A partir de las muestras de estanques y raspado de epider- mis de peces infectados se aislaron cultivos puros de ocho diferentes especies de hongos y oomyce- tos, de los cuales se identificaron tres géneros de hongos: Phoma sp., Trichoderma sp. y Aspergillus sp., y un genero de oomyceto: Saprolegnia sp. Los organismos A (Phoma sp.), B (Trichoderma sp.), D (Saprolegnia sp.) y H fueron obtenidos de mues- tras de estanques dulceacuícolas, por otro lado, los organismos C (Aspergillus sp.), E, F, y G fueron obtenidos del raspado de epidermis de la parte media lateral de peces infectados (figura 3). De los organismos aislados se hizo su identificación con claves taxonómicas y reacciones con el kit BIAADETECT obtenido a partir de D. coccus.
InvEstIgaCIón UnIvErsItarIa MUltIDIsCIplInarIa - año 5, no5, DICIEMbrE 2006 15