Page 30 - InvUnivMult2004

Facultad de Ciencia y Tecnología
Obtención de la secuencia completa del cDNA que codifica para AnaD7r. Para conocer la secuencia completa del cDNA de AnaD7r, se diseñaron los iniciadores internos D7-N y D7-C (Figura 3A), a partir de la secuencia de cDNA parcialmente secuenciada. Con estos iniciadores se llevaron a cabo reacciones de secuenciación, lo que nos permitió completar la secuencia de nucleótidos del cDNA de AnaD7r. El cDNA completo de AnaD7r consiste de 629 pb y codifica para un probable producto de traducción de 169 aminoácidos. La proteína AnaD7r tiene un probable péptido señal de 20 aminoácidos y varios sitios probables de fosforilación (Figura 3A). El peso molecular (PM) y el punto isoeléctrico (pI) teórico de la proteína AnaD7r madura son de 16.6 kDa y 7.6, respectivamente.
Comparación de la secuencia de aminoácidos de AnaD7r con D7r de otros mosquitos vectores. El probable producto de traducción del cDNA de AnaD7r se comparó con secuencias D7r disponibles en la base de datos. AnaD7r tiene alta identidad con D7r3.2 (82%) y D7r3.1 (85%) de An. darlingi (Calvo, De Bianchi, James y Marinotti, 2002), D7r3 de An. gambiae (57%) (Arca et al., 2002), D7r3 de An. arabiensis (60%) (Valenzuela et al., 2002) y D7r4 de An. stephensi (58%) (Valenzuela et al., 2003). La identidad entre AnaD7r con D7r de otros mosquitos Anopheles, se demostró mediante la alineación de las secuencias de aminoácidos de esas moléculas (Figura 3B).
Figura 3. Representación esquemática y alineamiento de la proteína AnaD7r con D7r de otros mosquitos Anopheles
En A se muestra un esquema del probable producto de traducción del cDNA de AnaD7r, el cual produjo una secuencia de 169 aminoácidos (señalados en orden de 20 aminoácidos en la base del esquema). Dentro de esa secuencia se esquematiza el probable péptido señal (marcado en gris) en la región N-terminal (NH2) y varios sitios probables de fosforilación (marcados en blanco) a través de la secuencia hasta la región carboxilo terminal (COOH). D7-N y D7-C son los iniciadores internos que se utilizaron para completar la secuencia del cDNA. En B se muestra el alineamiento de la secuencia de aminoácidos de AnaD7r con D7r de An. darlingi (AndD7r 3) y An. gambiae (AngD7r-3 y AngD7r2) obtenidos de la base de datos. Los aminoácidos idénticos entre esas secuencias se señalan con un asterisco(*).
A
NH2
1 20 40 60 80 100 120 140 160
COOH
B
D7-N D7-C
INVESTIGACIÓN UNIVERSITARIA MULTIDISCIPLINARIA - AÑO 3, No3, DICIEMBRE 2004 31