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Ciencia y Tecnología
Tabla 1. Intensidad relativa de las bandas de proteínas del epitelio de estómagos de hembras Ae. aegypti durante la hematofagia.
200 + - - - 100 - + - ++
78 - - + - 70 + - - - 50 ++ - - - 45 ++ + + +++ 35 + - - - 28 - ++ +++ ++++ 24 ++ - - -
Se hizo una evaluación cualitativa de la intensidad de las bandas en el gel PAGE-SDS donde se comparan las proteínas presentes en los estómagos alimentados con azúcar y a tres tiempos PAS. A.- Insectos alimentados con azúcar; 3 h PAS.- estómagos alimentados 3 hPAS; 6 h PAS.- estómagos después de 6 h; 9 h PAS.- estómagos disectados a las 9 h PAS. Las cruces describen la cantidad de la proteína en la banda, mientras que el guión describe la ausencia de la banda.
Identificación de proteínas que modifican su presencia en los estómagos de Ae. aegypti durante la hematofagia. En este trabajo se observaron moléculas de los estómagos de Ae. aegypti que modifican su expresión en respuesta a la alimentación con sangre. Una de las bandas de 40 kDa, presente en estómagos alimentados con azúcar, que desaparece cuando el mosquito se alimenta con sangre y que reaparece a las 9 hPAS, se identificó mediante MALDI-TOF/MS (ver tabla 2). Esta banda correspondió a la serpina 4 de Ae. aegypti, un inhibidor de serina proteasas. En D. melanogaster se había descrito previamente un ortólogo de la serpina 4, molécula que participa en la regulación de la secreción de proteínas mediante la inhibición de la proprotein convertasa similar a la subtilisina (SPCs) que es un grupo de enzimas que controla la actividad proteolítica de muchas proproteinas, proneuropéptidos y otras proteínas que participan en la vía secretoria (Ragg, 2007; Oley et al., 2004; Osterwalder et al., 2004; Richer et al., 2004) (ver tabla 2).
Tabla 2. Características de la proteína de 40 kDa identificada por MALDI-TOF/MS.
Los valores m/z de los fragmentos generados durante el análisis por MALDI-TOF/MS se usaron para la búsqueda en la base de datos de péptidos deducidos del genoma de Ae. aegypti, usando el programa MASCOT. A partir de la secuencia de la proteína identificada se obtuvieron los valores fisicoquímicos teóricos de la proteína, sin considerar modificaciones post-traduccionales. pI.- punto isoeléctrico. PM.- peso molecular en kilodaltones (kDa). Cobertura.- Porcentaje de aminoácidos de la proteína desconocida que corresponden a la entrada de la base de datos. Score.- Bit Score, coeficiente calculado a partir de los residuos idénticos (>80 se considera idéntico).
kDa
A
3 h PAS
6 h PAS
9 h PAS
130
+
-
-
-
85
-
+
++
+++
73
-
+
++
+++
55
+
-
-
++
49
-
+
-
-
40
++
+
+
+++
31
++
-
-
-
26
-
++
+++
++++
18
-
+
++
+++
Nombre
Familia
pI
PM
Cobertura
Score
Serpina 4
Inhibidor de serina proteasas
5.84
43.47
31%
162
124
INVESTIGACIÓN UNIVERSITARIA MULTIDISCIPLINARIA - AÑO 8, No8, DICIEMBRE 2009