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INVESTIGACIÓN UNIVERSITARIA MULTIDISCIPLINARIA - AÑO 12, No12, ENERO - DICIEMBRE 2013
Facultad de Ciencia y Tecnología
Resultados
Análisis proteómico. Las proteínas de estómagos cultivados ex vivo tratados con PGE2 fueron analizadas mediante electroforesis bidimensional. En los geles del control (C) y de los estómagos tratados con PGE2 se resolvieron alrededor de 300 manchas de proteína donde se observó que varias de ellas modificaron repro- duciblemente sus niveles de expresión (figura 1).
Figura 1.
Análisis proteómico diferencial de proteínas de estómagos de mosquitos hembras de An. albimanus tratados con PGE2. Las proteínas se analizaron por electroforesis bidimensional, el IEF se realizó en un gradiente de pH 4-7 en tiras de 7 cm y la segunda dimensión en PAGE- SDS al 12%. Los geles se tiñeron con azul de Coomassie G250. En el lado izquierdo se muestran las proteínas de los estómagos control; del lado derecho se muestra el análisis de las proteínas de estómagos tratados con PGE2. Seis proteínas que mostraron expresión diferencial (flechas) fueron seleccionadas para su análisis por ESI-LC-MS/MS
Para este trabajo se eligieron seis manchas cuya expresión fue modificada por efecto de la PGE2, se identifi- caron por ESI-LC-MS/MS y éstas correspondieron a ATPasa mitocondrial, calreticulina, tres isoformas de actina y una serina proteasa (tabla 1, datos de la columna giNCBI). Para cada molécula se hizo la comparación entre los puntos isoeléctricos (pI) y masas moleculares calculadas con los datos de secuencia obtenidas de la base de datos (datos de la columna gi NCBI) y se encontró alta coincidencia. Las variaciones se pueden deber a modificaciones post-traduccionales.
Tabla 1. Identificación por espectrometría de masas de las proteínas con expresión diferencial en estómagos de mosquitos hembras de Anopheles albimanus tratados con PGE2
Punto1
PM /pI2 Exp
Mr/pI3 Teórico
Nombre
Especie
gi NCBI
Péptidos identificados
% cobertura
Score
1
56/4.2
46779/4.36
Calreticulina
Anopheles albimanus
76797617
3
6
101
2
50/4.8
53838/5.03
Subunidad beta ATP sintetasa
Aedes aegypti Anopheles darlingi
157132308 312371563
7 7
15 15
297 297
3
42/5.2
42134/5.22
Actina 2 específica de músculo AGAP011516-PA
Proteína hipotética AND_05571
Aedes aegypti Anopheles gambiae Anopheles darlingi
33642243 157016476
312382027
9 9
9
25 25
25
394 394
394
4
42/5.4
41934/5.44
Actina 3 específica de músculo
Aedes aegypti
33642245
12
31
552
5
26/5.5
41934/5.44
Actina 3 músculo específica
Aedes aegypti
33642245
4
9
166
6
23/5.6
29176/4.72
Serina Proteasa
Anopheles gambiae
1644281
1
11
60
1. Los puntos seleccionados en el gel bidimensional se identificaron por ESI-LC-MS/MS
2. PM/pI Peso molecular/punto isoeléctrico obtenidos experimentalmente
3. Mr/pI Masa relativa/punto isoeléctrico deducidos de las secuencias depositadas en las bases de datos