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Facultad de Ciencia y Tecnología
se mantengan concentraciones terapéuticas en la epidermis al emplear los sistemas convencionales de liberación de fármacos (cremas y lociones), esto hace que se requieran múltiples aplicaciones para el tratamiento y que en muchas ocasiones el paciente no termine el tratamiento. Lo anterior hace que el ketoconazol sea un buen candidato para ser incor- porado en un sistema de liberación de fármaco como lo son las SLN y de esta forma mejorar su desempeño como agente antimicótico (Manual, 2013).
Objetivo
Formular y evaluar nanopartículas sólidas lipídicas cargadas con ketoconazol, empleando la técnica de fusión-homogeneización en caliente, usando como modelo Candida albicans.
Método
Preparación de nanopartículas lipídicas sólidas vacías y cargadas con ketoconazol, utilizando homogeneizador de alta velocidad y ultraso- nicación. Se prepararon nanopartículas lipídicas sólidas (SLN) variando la fracción volumétrica (j=masa lípido/volumen total) y la concentración de estabilizante (poloxámero PF68 y PF407). Se utiliza- ron valores de j de 0.25; 0.5 y 1.0, y de poloxámero de 25 y 50 mg/ml en agua deionizada. Todas las formulaciones contaron con la adición de lecitina de huevo (1 a 5 en relación con la matriz lipídica). Las SLN fueron preparadas a una temperatura 10 °C por arriba de la temperatura de fusión del lípido, empleando un homogeneizador Ultraturrax T18 (IKA-Labortechnik, GmbH & Co. Staufen, Alemania) equipado con el accesorio dispersante S18N-19G a diferentes velocidades y tiempos, seguido de cuatro ciclos de sonicación de 2 minutos cada uno. Una vez que se obtuvieron las nanopartículas vacías, se procedió a incorporar el principio activo en las nanopartículas, para ello, una vez que el lípido es- tuvo fundido se le adicionó el fármaco y finalmente proceder como ya se ha explicado con anterioridad.
Tamaño promedio de partícula y potencial Z de las SLN. La distribución del tamaño de partícula se determinó por difracción de luz láser (Horiba, Partica LA 950) que mide en un intervalo de 0.01 μm hasta 3000 μm, y por dispersión de luz láser con un
equipo Malvern Zetasizer NanoZS, que mide en el intervalo de 0.1 nm y 6 μm. El potencial Z fue medido por espectroscopía de correlación fotónica utilizan- do un Nanosizer ZS ZENN3600 (Malvern Instruments Ltd, Malvern, UK) por movilidad eletroforética. Los valores reportados son el promedio de cinco resul- tados. Las mediciones de movilidad electroforética fueron convertidos a potencial Z usando la ecuación de Smoluchoski.
Microscopía electrónica de transmisión (TEM). TEM fue usado para caracterizar la microestructura de las SLN. Una gota de la muestra fue aplicada en forma de película en una rejilla de cobre, se adicionó una solución de ácido fosfotúngstico sobre la rejilla. Las muestras fueron examinadas usando un micros- copio electrónico de transmisión de alta resolución (HRTEM, Jeol 2100F, Japón).
Liofilización: Las SLN fueron liofilizadas usando una liofilizadora (Labconco, Missouri, USA). Se uti- lizó un congelamiento lento (-20 °C). Las muestras fueron liofilizadas por 48 horas de -20 a 20 °C con incremento de 3 °C por hora. Las SLN fueron recons- tituidas con agitación magnética para incorporarlas en el hidrogel.
Antibiogramas SLN con ketoconazol. Las nano- partículas lipídicas sólidas fueron ensayadas para verificar si presentaban actividad antifúngica contra Candida albicans cepa ATC10231. Se empleó el mé- todo de difusión en disco para evaluar la actividad, para ello, las muestras fueron dispersadas en agua para obtener cierta concentración en _g/disco. Las zonas de inhibición se midieron al final del periodo de incubación y que fue de 24 h a 35 ± 2 °C. Se em- pleó como referencia 50 _g ketoconazol de la marca Bio-Rad y se probaron en las mismas condiciones.
Preparación de SLN incorporadas en hidrogel.
El hidrogel fue preparado utilizando carbopol 940 (0.25 %). El polímero fue dispersado en agua deio- nizada con glicerol (1%) y se dejó humectando toda la noche. El glicerol se añadió con el fin de aumentar la estabilidad de la dispersión de las nanopartículas y controlar la formación del hidrogel. La dispersión de las SLN con ketoconazol que se incorporó fue del 1 % con una agitación de 300 rpm durante 5 minutos. El hidrogel fue ajustado a un pH de 7 (el pH inicial fue de 3.5) con gotas de trietanolamina. Este hidrogel fue almacenado en contenedores opacos a 4 °C.
INVESTIGACIÓN UNIVERSITARIA MULTIDISCIPLINARIA - AÑO 12, No 12, ENERO - DICIEMBRE 2013
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