Page 73 - InvUnivMult2015

Facultad de Ciencia y Tecnología
compuestos orgánicos aromáticos produciendo ca- tecoles. En mamíferos estas enzimas participan en la detoxificación de hidrocarburos policíclicos aromá- ticos e inactivan hormonas esteroides, entre otros sustratos. La enzima mejor caracterizada de este grupo es la 3a-hidroxi-esteroide deshidrogenasa/ dihidrodiol deshidrogenasa (3a-HSD/DD, 34-37kDa) (DDH), la cual puede estar en formas mono y dimé- ricas y metaboliza andrógenos, glucocorticoides, prostaglandinas y otros sustratos como hidrocar- buros aromáticos policíclicos (PAHs) los cuales son contaminantes industriales (Hung y Penning, 1999; Lacroix et.al., 2013; Rižner y Penning 2013).
Para los insectos hay poca información respecto a la presencia y función de la DDH, aunque se describió que esta enzima se expresa diferencial- mente entre las castas de abejas (Apis mellifera) y su efecto es determinante en el fenotipo de las reinas y obreras y la hipótesis es que estos efectos se deben a su acción sobre las hormonas durante el desarrollo (Evans y Wheeler, 1999). En un tra- bajo previo, observamos que hembras adultas del mosquito Aedes aegypti, mosquito de importancia en salud pública por ser transmisor de varios virus como los productores del dengue, Chikungunya y la fiebre amarilla, aumentan la expresión de la DDH bajo el efecto del glucocorticoide dexametasona (Dex), para iniciar una respuesta de estrés o para su degradación y este resultado sugirió la acción de las prostaglandinas (PGs), como moduladores fisiológicos en los mosquitos (Stanley 2006; Stanley et.al., 2009; Hernández-Estrada et.al., 2007). Por otra parte, nuestro grupo demostró que en mos- quitos Anopheles albimanus, las prostaglandinas (PGs) modifican la producción de péptidos antimi- crobianos (García-Gil et.al., 2008) y pueden iniciar reacciones celulares posiblemente orientadas a resistir al estrés, incrementando la evidencia de la importancia de las prostaglandinas en la regula- ción metabólica en los insectos (González-Calixto et.al., 2015).
Objetivo
En este trabajo se estudió la expresión de la DDH en el mosquito Aedes aegypti durante el ciclo de vida y en adultos hembra bajo el efecto de prostaglandinas, sus metabolitos e inhibidores de su síntesis.
Material y método
Reactivos
Para la purificación y reacciones de amplificación de ácidos nucleicos se usaron reactivos de grado de biología molecular, de las marcas SIGMA y GIBCO- Life Sciences.
Organismos
Los mosquitos Ae. aegypti cepa Cuernavaca fueron cultivados en las siguientes condiciones: Las larvas de mosquito se cultivaron en agua purificada a 23- 28o C y se alimentaron con alimento para gato de pescado pulverizado (Whiskas). Los mosquitos adul- tos se cultivaron a 23-28o C y 70-80% de humedad relativa y se alimentaron con una solución azucarada al 10% (Cazares-Raga et.al., 2014).
Disección y cultivo de abdómenes
Para obtener los abdómenes los mosquitos fueron inmovilizados a -20° C durante 1 minuto, se coloca- ron sobre un portaobjetos que se mantuvo sobre hielo durante el proceso de disección; ésta se llevó a cabo observando a través de un microscopio es- tereoscópico (Leica GZ6).
Para evitar la desecación durante el proceso de disección, al mosquito se le puso una gota de so- lución salina amortiguada con fosfatos (PBS: NaCl 140 mM, KCl 2.6 mM, KH2PO4 1.5 mM y Na2HPO4 20 mM; pH 7.4), el abdomen (que contiene al cuerpo graso, túbulos de Malpighi, estómagos, ovariolas y hemolinfa) se cortó con una aguja nueva de una jeringa de insulina (calibre 27) y se colocó en 50 μl de medio Schneider sin suero fetal bovino (GIBCO-BRL) en tubos Eppendorf y se cultivaron a temperaturas de 22 – 24° C, en presencia de Dex, ibuprofeno (Ibu) o indometacina (Indo) (Hernández-Estrada et.al., 2007).
Medición de la expresión de mensajeros por RT-PCR
Para medir la expresión de la DDH se realizó la reac- ción de amplificación en cadena de la polimerasa a partir de DNA complementario (RT-PCR), a partir de mRNA aislado de los abdómenes de mosquitos Ae. aegypti usando el sistema TRIzol® Reagent siguiendo el protocolo del fabricante (Life Technologies; Thermo Fisher Scientific Inc.). Los productos de la reacción se resolvieron por electroforesis en agarosa-bromuro de
INVESTIGACIÓN UNIVERSITARIA MULTIDISCIPLINARIA - AÑO 14, No 14, ENERO - DICIEMBRE 2015
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