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Facultad de Ciencia y Tecnología
etidio y la intensidad de las bandas se registró a partir de las imágenes mediante un fotodocumentador LAS-4000 (GE Healthcare Life Sciences). Los experimentos se hicieron por triplicado. Para calcular la expresión relativa se usó como referencia la expresión del gen constitutivo de Actina de 400 pb. Los resultados se expresaron como la abundancia relativa porcentual (AR%) del mensajero DDH respecto al control constitutivo de Actina.
Resultados
Dada la posible función de la DDH en el mosquito Ae. aegypti como reguladora de la concentración de hormonas esteroides como la ecdisona, fue de interés en este trabajo analizar la abundancia del mensajero a lo largo del ciclo de vida. En la fase de huevo se encontró la presencia del mensajero de DDH y notablemente se encontró que con RNA de diferentes mosquitos el tamaño del amplificado varió, según se apreció en el cambio de migración electroforética (figura 1, líneas H1-H3 y datos no mostrados) sugiriendo la posible existencia de polimorfismo en los alelos que codifican esta enzima en la población de mosquitos. La concentración relativa del mensajero aumentó en la fase de larva L1, disminuyó significativamente en L2, volvió a aumentar durante L3 y esta po- blación de mensajeros probablemente se vuelve a consumir en L4 y volvió a aumentar en la fase de pupa. En la hembra adulta se encontró la máxima concentración relativa y fue mayor a la del macho adulto (ver figura 1).
La expresión del mensajero de DDH en abdómenes cultivados in vitro fue evaluada. Se observó que en el mosquito existe una producción basal del mensajero, la cual fue disminuida significativamente por Dex, inhibidor de la fosfolipasa 2 (PLA2), y por los inhibidores de las ciclo-oxigenasas (COX) Ibu e Indo. Por otra parte se observó que el ácido araquidónico (AA) por sí mismo indujo una fuerte expresión de DDH y revirtió parcialmente el efecto de los inhibidores de la síntesis de PGs aunque el efecto fue mayor sobre Dex que sobre Ibu e Indo (ver figura 2). Como control se analizó la expresión de la DDH en abdómenes de machos y se confirmó su expresión menor a la de las hembras y en células de la línea C6/36, derivada de embriones de la especie cercana Ae. albopictus las cuales también produjeron el mensajero (ver figura 2).
Figura 1. Expresión de DDH durante el ciclo de vida del mosquito Ae. aegypti
(A) Se observó la expresión de la banda esperada de 380 pb y otra de 450 pb, sugiriendo la existencia de dos alelos. H.- Huevos. L#.- Larva. Pu.- Pupa. .- Macho. .- Hembra. (B) En el gráfico las barras muestran el porcentaje de abundancia relativa (%AR) de la expresión de los mRNA de la DDH para los estadios del ciclo de vida: (huevo H), larva 1 (L1), larva 2 (L2), larva 3 (L3), larva 4 (L4), pupa (Pu), hembra y macho). Se muestra el control de actina.
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INVESTIGACIÓN UNIVERSITARIA MULTIDISCIPLINARIA - AÑO 14, No14, ENERO - DICIEMBRE 2015