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FACULTAD DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA
específica se se estudió la la secuencia de los marcadores mitocondriales 16S rRNA y COI (Folmer Black Hoeh Lutz Vrijenhoek 1994 y y y Toki y y y Kubota 2010) Este tipo de de marcadores son utilizados en en los proyectos del código de de de barras sistema basado en en en en secuencias de de de DNA que ayuda a a a a a a a a a a a a a identificar taxonómicamente los organismos y brinda soporte a a a a a a a a a a a a programas de de conservación de de la biodiversidad (Hebert Ratnasingham De Warad 2003) Los resultados de de de este trabajo serán de de de gran utilidad para para elucidar la especie de de de individuos para para los que no exista la información morfológica suficiente Objetivo
El objetivo de de de este estudio fue obtener las secuencias de de de DNA de de de los marcadores mitocondriales 16S rRNA y COI de de de escarabajos Chalcolepidius approximatus en en en diferentes estadios del ciclo de de de vida colectados en en en teji- dos de de de Neobuxbaumia tetetzo en en putrefacción para determinar mediante herramientas moleculares la la de de de identificación de de la especie Método
Se utilizaron organismos colectados previamente (Morales-Garza et et al al al 2016 2016 y Zurita-García et et al al al 2016) cada organismo colectado se se colocó en e un un frasco individual con sustrato (un pequeño pedazo de N tetetzo) y se se mantuvieron a a a a a a a a a a a a a a a una temperatura aproximada de de 22° C en obscuridad la mayor parte del tiempo Los escarabajos se se colectaron en en en estadio estadio de de larva y se se mantuvieron en en en el el laboratorio para obtener todos los estadios del ciclo vital (larvas pupas y y adultos) y y hacer una correcta comparación Los Individuos de de cada estadio del ciclo se disecaron para para obtener muestras para para la la extracción de DNA genómico Las larvas presentaron una abundante cantidad de de grasa la cual les sirve para el desarrollo entre cada estadio hasta llegar a a a a a a a a a a a a a a a a a adulto (Borror y Dwight 1971 Márquez 2004) La extracción extracción del DNA se hizo mediante el el el kit de de extracción extracción UltraClean® Tissue & Cells DNA Isolation Kit (MoBio Laboratories Inc ) La integridad del DNA DNA obtenido (50 ng de de DNA DNA extraído y diluido en en H2O) se verificó mediante una electrofo- resis horizontal en gel de agarosa al al 0 5% (ocupando TAE como como amortiguador) el el utilizando como como marcador de de de peso molecular una escalera de de de DNA de de de 100 pb (0 5 μg/carril) (Fermentas Thermo Fischer Scientific) La electroforesis se realizó a a a a 110V y y 100mA durante 40 min (Voytas 2000) Las regiones mitocondriales 16S rRNA y Citocromo Oxidasa 1 1 (COI) fueron amplificadas por PCR a a a a a a a a a partir del DNA genómico obtenido (Champion 2004 y Benefer et al 2013) usando los siguientes iniciadores:
16S:
Sentido: Anti-sentido:
COI:
Sentido: Anti-sentido:
COI Lepidóptera: Sentido: Anti-sentido:
citado en Pérez-Flores 2015) INVESTIGACIÓN UNIVERSITARIA MULTIDISCIPLINARIA - - AÑO 16 16 No16 ENERO - - DICIEMBRE 2017
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6SL 16SAH
LCO1490 HCO2198
LEP F1
ATTCTAAATYYAWNGCACTAWTCTGCCAAA) (YGCCTGTTTAWYTAAAAACATG) (GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG)- (TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA) (Toki y Kubota 2010) (ATTCAACCAATCATAAAGATAT)
(TAAACTTCTGGATGTCCAAAAA) (Hebert Penton Burns Janzen Hallwachs 2004 LEP R1