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FACULTAD DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA
La mezcla de de de reacción para PCR consistió en: 5 5 mM MgCl2 10 μM μM de de de cada dNTP (Sigma-Aldrich) 2 2 5 5 μM μM de de de cada primer (Sigma-Aldrich) 4 U Taq polimerasa (Invitro gen) y 50 ng de de Muestra de de DNA Las reacciones de PCR se llevaron a a a a a a a cabo en en un termociclador (Applied Biosystems) con el siguiente progra- ma de amplificación: (1) 95°C 1 1 1 1 1 min min min min (2) 35 ciclos: 95oC 1min 40°C 1 1 1 1 1 min min min min 72°C 1 1 1 1 1 5 5 5 5 mins : : : (3) extensión a 72oC 7mins Los productos de de PCR obtenidos fueron separados por electroforesis horizontal en en gel de de agarosa al al 1% a a a a a a a a 100V durante 90 minutos (Voytas 2001) para para posteriormente a a a a a a a a a a a partir de fragmento separado en en en gel realizar una re-amplificación con con las mismas condiciones de PCR Los fragmentos de de DNA fueron secuenciados en en en un sistema de de 16 capilares (Applied Biosystems 3100) usando iniciadores universales en dirección 5’ –> 3’ (Facultad de Estudios Superiores Iztacala-UNAM) Las secuencias obtenidas se se empalmaron y analizaron empleando el software MEGA 5 (Tamura et al al al 2011) Las secuencias resultantes se se compararon con los datos registrados en en en el Centro Nacional para para la Información de la la Biotecnología (NCBI GenBank) mediante una búsqueda con el programa BLAST (https://blast ncbi nlm nih gov/Blast cgi) para caracterizar a a a a a a a a a a a a a á a a esta especie de de de escarabajo de de de acuerdo con la la máxima identidad pre- sentada por los los registros del GenBank Las secuencias generadas durante este estudio serán agregadas a a a a a a a a á a a a a los los bancos de de información del GenBank Resultados
Se registró un un tiempo aproximado de de de de un un año para completar el ciclo de de de de vida de de de de larva a a a a a a a a a a a a adulto de de de de C appro- ximatus la la la fase fase larvaria dura dura de de de 9 a a a a a a a a a a a a a a a 11 meses la la la fase fase de de de pupa dura dura de de de 3 a a a a a a a a a a a a a a a 4 semanas Se obtuvo DNA de de de de de C approximatus de de de de de las tres fases del ciclo de de de de de vida con diferentes grados de de de de de homogeneidad siendo la la muestra más heterogénea la la de pupa (ver figura 1) Figura 1 1 Producto de de la extracción de de DNA analizado en gel a a a a a a a a a a a a a a agarosa 0 5 1% a) Larva b) Pupa c) Adulto Posteriormente con el el DNA obtenido se hizo PCR probando los diferentes iniciadores Los productos del PCR se analizaron mediante electroforesis vertical en en en en gel de agarosa al al al 1% obteniendo fragmentos con un tamaño aproximado de de 680 pb (ver figuras 2 3 y 4) Se obtuvo un producto de de PCR con los iniciadores LEP sin embargo no se se obtuvo ninguna secuencia (ver figura 3) 78
INVESTIGACIÓN UNIVERSITARIA MULTIDISCIPLINARIA - - AÑO 16 16 No16 ENERO - - DICIEMBRE 2017