Page 25 - InvUnivMult2004

Facultad de Ciencia y Tecnología
Figura 3. Extracción de proteínas
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En un gel de proliacrilamida (PAGE-SDS) al 10%, se colocaron 2.6 μg / μl de las proteínas extraídas después de cada tratamiento. Carril 1: marcador de peso molecular; carril 2: proteínas control; carril 3: pro- teínas sometidas al efecto de naproxeno; carril 4: proteínas some- tidas a dexametasona. Las flechas de la derecha señalan proteínas que se vieron alteradas por efecto de los inhibidores.
Figura 4. Microscopia de células hemociticas
En las imágenes podemos observar células de cuerpo graso de cucaracha de Madagascar (Gromphadorina portentosa). A. células de cuerpo graso control; B. células de cuerpo graso incubadas con inhibidor y teñidas con rojo neutro.
Durante el ensayo realizado para analizar el efecto de los inhibidores de prostaglandinas sobre la acti- vidad de profenoloxidasa, se pudo observar que en los pozos 1 y 5 no hay melanización, ya que son con- troles negativos.
En el pozo 2 se observa una reacción típica de mela- nización provocada por efecto de la profenoloxidasa siendo éste el control positivo. En los pozos 3 y 4 se observa una inhibición de la reacción por efecto de
los fármacos dexametasona y naproxeno, respectiva- mente, presentando una mayor disminución en el pozo 4, lo que nos permite determinar que la dexametasona tuvo un mayor efecto sobre la reacción en cascada de la profenoloxidasa (Figura 1).
En el histograma se muestran los resultados obtenidos en el ensayo espectrofotométrico de proFO, donde se muestra que la dexametasona inhibió 63% de la actividad, en tanto que con naproxeno, la inhibición de la reacción de la melanización fue 41%. La figura estadística de estos resultados se aseguró mediante una prueba estadística de Kruskal-Wallis, con un valor de probabilidad del 0.002 (Figura 3).
En el gel unidimensional de acrilamida se observaron patrones similares, en general, pero hubo algunas diferencias, ya que alrededor de 15 kDa, un péptido antimicrobiano presentó mayor intensidad en la muestra de insectos control. En los insectos tratados con LPS, disminuye gradualmente en las muestras con naproxeno y dexametasona, respectivamente. Entre 50 y 100 kDa, se observó una banda en la muestra con naproxeno, pero inhibida en las muestras con- trol y dexametasona.
Al realizar las observaciones microscópicas de la hemolinfa de la cucaracha, encontramos células que tenían gránulos en su interior en la hemolinfa con- trol, dichas células se encontraban íntegras. En la hemolinfa que se incubó con naproxeno y dexame- tasona encontramos que, en ambos casos, las célu- las se habían roto y liberaron los gránulos.
Discusión
Los datos reportados en este trabajo indican un efecto de los inhibidores de la síntesis de prostaglandinas sobre la actividad de la profenoloxidasa. Se han re- visado estudios hechos con el lepidóptero Galleria melonella –como los realizados por Craig y colabo- radores– donde se demostró el efecto de la dexameta- sona en la inhibición de microagregados de hemocitos durante el reto bacteriano y sobre la disminución de la actividad de la fenoloxidasa.
Por otra parte, los resultados de algunas líneas de in- vestigación con Manduca sexta confirman que ciertas prostaglandinas son responsables de la formación de nódulos y de la microagregación de hemocitos por reto bacteriano (Miller y Stanley, 2004).
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INVESTIGACIÓN UNIVERSITARIA MULTIDISCIPLINARIA - AÑO 3, No3, DICIEMBRE 2004