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InvEstIgaCIón UnIvErsItarIa MUltIDIsCIplInarIa - año 5, no5, DICIEMbrE 2006
Facultad de Ciencia y tecnología
inmune, compuesto por un conjunto de proteí- nas, aun no totalmente conocidas, que se activan en cascada y desencadenan la melanización del agente invasor. Algunos miembros de la cascada son proteasas en forma inactiva (zimógenos) que al ser activados, adquieren capacidad proteolítica llegando finalmente al corte de la proFO para generar la forma activa (FO). La FO participa en la melanización y formación de nódulos y cápsulas, así como en la liberación de moléculas opsonizantes, quimiocinesis celular y coagulación (Söderhäll y Cols., 1990; Ashida, 1991).
El sistema proFO está ampliamente descrito en los invertebrados y actúa en la amplificación de la reac- ción inmune y en la inactivación de microorganismos invasores; para dispararse requiere:
1.- Reconocimiento: el reconocimiento de partículas ajenas al cuerpo de los artrópodos ocurre cuando cé- lulas de la hemolinfa (hemocitos) o de otros órganos como el cuerpo graso reconocen específicamente (aunque aún no esta definido molecularmente cómo), componentes microbianos de la pared celular de bac- terias, como lipopolisacáridos de las Gram (-), los pepti- doglicanos de las Gram (+), el zimosán (b 1,3 glucanos) de levaduras y hongos, así como células o parásitos de mayor tamaño (Johansson y Söderhäll 1989; Söderhäll y Cols., 1990; Ashida, 1990) y reaccionan liberando al medio los componentes del sistema proFO.
2.- Activación: una vez en la hemolinfa, las enzimas de la vía proFO se activan una tras otra ("reacción en cascada") comenzando con la activación de al menos dos serina-proteasas llamadas proteínas activadoras de la profenoloxidasa 1 y 2. La serina-proteasa 1 actúa sobre la número dos, amplificando la reacción, y la enzima dos a su vez sobre la profenoloxidasa convirtiéndola en fenoloxidasa y activándola. Ésta última, al estar activa, es la encargada de la con- versión, por oxidación, de fenoles en quinonas, las cuales se polimerizan formando melanina. La mela- nina inhibe la actividad enzimática tanto bacteriana como fúngica (Cerenius y Söderhall, 2001).
En los últimos años se ha descrito, a las prosta- glandinas (PGs) como moléculas moduladoras de la respuesta inmune en algunos artrópodos (Rowley et al., 2005). Las PGs derivan de los ácidos grasos esenciales de 20 carbonos, y el ácido araquidónico es el precursor más abundante; el cual puede a su vez, formarse a partir del ácido linoléico. Dado que la concentración de ácido araquidónico libre
dentro de la célula es muy baja, su disponibilidad resulta de la liberación de los depósitos celulares de lípidos mediante numerosas hidrolasas (fosfoli- pasa A2, fosfolipasa C y la lipasa diacilglicerol. Estas fosfolipasas son activadas por diferentes estímulos físicos, químicos y hormonales, como son: trau- ma, infección, infusión con solución hipertónica, trombos, endotoxinas, estiramiento mecánico, esteroides sexuales y catecolaminas. La fosfolipasa A2 (PLA2) hidroliza la unión éster de los fosfolípidos de membrana, particularmente los que contienen fosfatidilcolina y fosfatidiletanolamina y liberan ácido araquidónico. En contraposición la fosfoli- pasa C separa el puente fosfodiéster, provocando una liberación de fosfatidilinositol, que libera ácido araquidónico a través de la desintegración de la lipasa diacilglicerol. Una vez liberado el ácido araquidónico, la vía de síntesis puede tomar dos direcciones: la vía de la lipooxigenasa o la vía de la ciclooxigenasa (Stanley, 2005).
Los inhibidores de la respuesta inmune seleccio- nados para este trabajo fueron: naproxeno, com- puesto que en mamíferos causa la disminución de los mediadores de inflamación al inhibir la Ciclooxi- genasa tipo I de tipo constitutivo. Por otro lado, la dexametasona que induce la lipocortina, proteína anti-inflamatoria, que inhibe la fosfolipasa A2, lo cual inhabilita la síntesis de PGS y lipooxigenasa (Stanley, 2006).
Objetivo
En este trabajo se evaluó la actividad de la proFO en la hemolinfa de C. montezumae en ausencia y pre- sencia los inhibidores de la síntesis de eicosanoides naproxeno (npx) y dexametasona (dexa).
Método
Reactivos: los reactivos utilizados en este trabajo fueron de la más alta calidad y se obtuvieron de las compañías Sigma Chem (St. Louis Missouri), Invitrogen y PE Applied Biosystems. Los reactivos para electroforesis provinieron de Gibco- BRL Life Technologies.
Material Biológico: para este trabajo se utilizaron acociles adultos de ambos sexos (C. montezumae),