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dentro de los cuales el ácido glutámico, isoleucina y valina son considerados factores de crecimiento y deben estar presentes en el alimento o medio de cultivo (Crueger y Crueger, 1989; Karoviéová y Ko- hajdová, 2003). La leche y el suero de leche bovina son considerados como fuentes de nutrientes para el crecimiento de bacterias del género Lactobacillus, ya que contienen fuente de nitrógeno en forma orgánica, complejos vitamínicos como el complejo B, pH adecuado, y una forma coloidal que hace disponible todo tipo de nutrientes. (Escobar, Rojas, Giraldo y Padilla-Sanabria., 2010) Sin embargo, es necesario realizar la formulación del medio de cul- tivo y determinar las condiciones de incubación con base en las necesidades específicas del lactobacilo aislado del pulque para optimizar y obtener un buen rendimiento del crecimiento del microorganismo y que el medio resulte rentable.
Objetivo
Formular y optimizar un medio de cultivo con materia prima de bajo costo que permita el buen crecimiento de la cepa de Lactobacillus obtenida del pulque.
Método
Microorganismo. Se empleó la cepa del género Lactobacillus aislado del pulque proveniente del área metropolitana de la Ciudad de México. La cepa se cultivó en agar MRS (DeMan, Rogosa y Sharpe, 1960) en condiciones de microaerobiosis, en un pH de 6.4 ± 0.2 a 29°C por 48 horas, se mantuvo en refrigeración a 4°C y se resembró cada 7 días.
Preparación de inóculos. Se partió de un cultivo puro de Lactobacillus sembrado en caja Petri con agar MRS por la técnica de estría masiva con aplica- dor de algodón estéril (césped). Se recolectó todo el contenido de la caja Petri y se vertió en un matraz Erlenmeyer de 250 mL con tapón de algodón con 100 mL de caldo modificado MRS (ver tabla 1); el cual consta de las sales y micronutrientes del Cultivo MRS, 5 g/L de extracto de levadura, 10 g/L de extracto de carne, 5 g/L de acetato de sodio, 1 g/L de polisorbato 80, 10 g/L de peptona de carne y 6% p/v de lactosa. El cultivo se incubó con pH inicial de 6.4 ± 0.2, 29°C ± 1 por 48 h sin agitación. Se determinó la concentra- ción microbiana del inóculo por medio del método de peso seco celular (Prit, 1975). En esterilidad, se
tomaron 5 mL de muestra por duplicado cada 2 horas durante un periodo de 34 horas. Las muestras fueron centrifugadas a 2000 rpm durante 8 minutos en una centrífuga Zeigen centrifuge Model 80-25. El paquete celular se filtró al vacío, se lavó con agua destilada y se puso a secar a 45°C en estufa por 24 h o hasta que se registró peso constante.
Tabla 1. Formula del medio de cultivo MRS modificado
Facultad de Ciencia y Tecnología
Componente
Concentración g/L
Extracto de carne
10
Peptona de carne
10
Extracto de levadura.
5
Lactosa
60
Acetato de sodio
5
Polisorbato 80
1
Fosfato de potasio*
2
Citrato de amonio*
2
Sulfato de magnesio*
0.1
Sulfato de manganeso*
0.05
INVESTIGACIÓN UNIVERSITARIA MULTIDISCIPLINARIA - AÑO 12, No 12, ENERO - DICIEMBRE 2013
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* Componentes que forman parte de las sales (micronutrientes) del medio de cultivo MRS
Influencia de la temperatura en el crecimiento de la cepa de lactobacilos. Se evaluaron tres tem- peraturas: 23°C, 29°C y 37°C. La tendencia estudio cinético de crecimiento fue evaluada en matraces Erlenmeyer de 500 mL con 250 mL de caldo MRS mo- dificado con 7% lactosa con pH inicial de 6.4 ± 2 sin agitación con un inóculo de 2% p/v (peso-volumen).
La biomasa se determinó por el peso seco celular (Prit, 1975). En esterilidad, se tomaron 5 mL de muestra por duplicado cada 2 horas durante un periodo de 34 horas. Las muestras fueron centrifugadas a 2000 rpm durante 8 minutos en una centrífuga Zeigen centrifu- ge Model 80-25. El paquete celular se filtró al vacío, se lavó con agua destilada y se puso a secar a 45°C en estufa por 24 h o hasta que se registró peso constante.
Influencia del tamaño de inóculo en el creci- miento de la cepa de lactobacilos. Se evaluaron dos concentraciones de inoculación: 2 y 5% p/v. Se realizaron Los estudios cinéticos de cultivo en ma- traces Erlenmeyer de 500 mL con 250 mL de caldo MRS modificado con 7% lactosa con pH inicial de 6.4 ± 0.2 sin agitación. En esterilidad, se tomaron 5 mL de muestra por duplicado en un rango de 2 a 4 horas durante 34 horas. Se utilizó el método del peso seco celular en la determinación de la biomasa bacteriana.