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INVESTIGACIÓN UNIVERSITARIA MULTIDISCIPLINARIA - AÑO 12, No12, ENERO - DICIEMBRE 2013
Facultad de Ciencia y Tecnología
Efecto de diferentes formulaciones en el crecimiento de la cepa de lactobacilos. Se evaluaron seis formulaciones diseñadas a partir de materia prima de bajo costo: 1) leche entera ultrapasteurizada comercial con concentración final 7% p/v lactosa; 2) Leche entera ultrapasteurizada comercial con concentración final 7% p/v lactosa y concentración 100% p/v sales MRS; 3) Suero de leche con concentración final 7% p/v lacto- sa, 4) Suero de leche con concentración final 7% p/v lactosa, concentración 100% p/v sales MRS 5) Suero de leche con concentración final 7% p/v lactosa, concentración 100% p/v sales MRS y 0.25% p/v de extracto de levadura y 6) Suero de leche con concentración final 7% p/v lactosa, concentración 100% p/v sales MRS y 5 g/L de extracto de levadura. Todos los estudios cinéticos fueron realizados a 29°C, pH inicial de 6.4, en mi- croaerobiosis y sin agitación, con un inóculo de 5% p/v. Como referencia del crecimiento se utilizó los estudios cinéticos que utilizan 5% inóculo a 29°C en caldo MRS con 7% lactosa y como control negativo se utilizó el agua peptonada sin fuente de carbono. Los matraces Erlenmeyer de 500 mL con 250 mL del caldo respectivo, se inocularon al 5% p/v desde el mismo matraz Erlenmeyer semilla de 250 mL, el cual contenía 100 mL de caldo MRS modificado y la cepa adaptada de Lactobacillus. Los estudios cinéticos de cultivo se inocularon al 5% p/v con el contenido del matraz semilla. Todos los matraces para los estudio cinéticos de crecimiento así como el matraz semilla se incubaron en las mismas condiciones: 29°C ± 1, en microaerobiosis, sin agitación, pH inicial de 6.4 ± 0.4 durante 34 horas.
En esterilidad, se tomaron 5 mL de muestra por duplicado en un rango de 2 a 4 horas durante 34 horas. Se utilizó el método del peso seco celular en la determinación de crecimiento microbiano.
Optimización del nuevo medio de cultivo. Después de seleccionar las dos mejores formulaciones que fueron los dos estudios cinéticos con la mayor concentración de biomasa: 1) leche entera ultrapasteurizada comercial con concentración final 7% p/v lactosa y concentración 100% p/v sales del medio de cultivo MRS y 2) suero de leche con concentración final 7% p/v lactosa y concentración 100% p/v sales del medio de cul- tivo MRS, se procedió a la optimización de la formulación. Se observó que la concentración de las sales MRS afectaban positivamente el crecimiento de la cepa por lo que se desarrolló una matriz experimental con las formulaciones seleccionadas con diferentes concentraciones de sales MRS: 10, 50 y 100% (ver tabla 2).
Los estudios cinéticos fueron realizados a 29°C ± 1, pH inicial de 6.4 ± 0.4, sin agitación, en microaerobiosis durante 34 horas. Se utilizó el método de peso seco celular en la determinación de biomasa bacteriana.
Tabla 2. Matriz experimental para la optimización de dos medios de cultivo para la cepa de Lactobacillus. Los estudios cinéticos fueron realizados con diferentes concentraciones de sales del medio de cultivo MRS
pH y determinación de azúcares totales en el medio de cultivo. Esta determinación se hizo por el mé- todo de antrona, descrito por Witham, Blaydes, y Devlin, (1971) al medio de cultivo optimizado. Se realizó la determinación en g/L en los tiempos 0, 4, 8, 18 y 30. A cada muestra de sobrenadante se le realizaron diluciones decimales hasta 10-06, y a la última dilución se le agregó resbalándolo por las paredes el reactivo de antrona y se dejó reaccionar durante 5 minutos en agua hirviendo, después de este tiempo, la muestra se enfrió en un baño con hielos para detener la reacción. La absorbencia se leyó a 600 nm en un espectrofotómetro Genesis Modelo 58. Cada muestra se trabajó por duplicado y la concentración de azúcares se estimó a partir de una curva patrón que contenía de 20 a 200 μg de lactosa/mL.
El pH fue medido en los mismos tiempos en que se realizó la determinación de azúcares totales, por medio de un potenciómetro manual Hanna previamente calibrado.
Concentración de micronutrientes del medio de cultivo MRS
Formulaciones
10%
50%
100%
Leche entera con 7% p/v lactosa
E1
E3
E5
Suero de leche con 7% p/v lactosa
E2
E4
E6